动物模型 | OVA过敏性鼻炎小鼠模型

OVA过敏性鼻炎小鼠模型

过敏性鼻炎(allergic rhinitis，AR) ，也称为变态反应性鼻炎，是特定人群接触致敏原后，由IgE介导的介质释放，并有多种免疫活性细胞和细胞因子等参与的鼻黏膜慢性炎症反应性疾病，是全世界最常见的慢性过敏性呼吸系统疾病之一。过敏性鼻炎的主要症状包括鼻痒、喷嚏、鼻分泌亢进、鼻黏膜肿胀等。研究表明，过敏性鼻炎是多种因素共同作用的结果，主要包括遗传因素和环境因素，甚至与饮食、体质强弱等也有关系。使用卵清蛋白（ovalbumins，OVA）腹腔注射和鼻内激发小鼠，是常用的过敏性鼻炎动物模型构建方法[1]。具体的步骤和检测如下：

1、实验动物：BalB/C小鼠，雌性，5周龄。

2、实验分组：对照组 ( Control ) 、模型组 ( Model)。

3、造模：适应性饲养7天后，在第1、8和15天通过腹腔注射300 μL 50 μg OVA 和 1 mg氢氧化铝混合液( 溶于磷酸盐缓冲液中) 使小鼠致敏。在第22天(最后一次OVA致敏1周后) ，小鼠每天接受OVA鼻内激发( 10 mg /mL， 20 μL /鼻孔) ，连续激发7d。对照组和模型组在同期灌胃等体积的生理盐水。

4、在用 OVA 进行最后一次鼻内激发后，记录每只小鼠 30 min 内的打喷嚏、挠鼻、清水样涕等症状来考察是否建模成功。

症状	评分
① 挠鼻	0 分，无挠鼻；1 分， 挠鼻几次；2 分，挠鼻不止；3 分，到处摩擦。
② 打喷嚏	0 分，无打喷嚏；1 分，1 ～ 3 个；2 分， 4 ～ 10 个；3 分，11 个及以上。
③ 清水样涕	0 分，无清水样涕；1 分，流到前鼻孔；2 分，超过前鼻孔；3 分，涕流满面。

5、取材和检测

（1）最后一次 OVA 激发24 h 后，从小鼠眼眶收集血液标本， 4 ℃ 、2，000×g离心 10 min 获得血清。

（2）麻醉小鼠后，用导管从气管切口处插入鼻咽部，用1 mL生理盐水冲洗鼻腔来收集 NALF。在 4 ℃ 5000×g 离心 10 min，收集上清液用于细胞因子的检测。将细胞沉淀重悬于1mL PBS中，在细胞离心涂片机上 600×g 离心6 min。自然晾干后，使用 DiffQuik 染色并计算嗜酸性粒细胞数。

（3）小鼠处死后，取鼻部组织并用 4% 多聚甲醛固定，切片，进行HE( 用于观察形态) 、Giemsa( 用于观察嗜酸性粒细胞) 、Periodic acid-Schiff ( 用于观察杯状细胞) 和甲本胺蓝 ( 用于观察肥大细胞) 染色。

（4）ELISA 试剂盒检测：小鼠 NALF 中的 Th1 相关细胞因子( TNF-γ 和 IL-12) 、Th2 相关细胞因子( TNF-α、IL-1β 和 IL-6) 、Th17 相关细胞因子( IL-17A) 水平；小鼠血清中 OVA 特异性 IgE 和 IgG1。

（5）western blot检测：将小鼠鼻黏膜组织剪碎、研磨， 提取蛋白，进行相关蛋白检测。

6、检测结果

与对照组相比，模型组小鼠有以下特点：

① NALF 中的总细胞和嗜酸性粒细胞数增加（图2）。

② 鼻黏膜组织上皮破坏、间质性水肿、斑块状出血、嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润、杯状细胞增生和肥大细胞增多，产生了明显的病理学改变 ( 图1和图2)。

③ 血清 OVA 特异性 IgE 和 IgG1 的水平均增加(图3) 。

④ NALF中Th1相关细胞因子(TNF-γ和IL-12) 水平变化不明显，而Th2相关细胞因子( TNF-α、IL-1β 和IL-6) 和Th17相关细胞因 子( IL-17A) 水平都明显增加(表1) 。

⑤ 鼻黏膜组织中 nucleus-NF-κB p65、ROR-γt 和 p-STAT3 的水平均增加(图4) 。

 

参考文献：

[1] 李化静,郝润梅,戴培,et al.儿茶素抑制卵清蛋白诱导的过敏性鼻炎小鼠模型炎症反应的机制研究[J].山东大学耳鼻喉眼学报, 2021, 35(4):7.DOI:10.6040/j.issn.1673-3770.0.2020.399.